嚢胞性線維症(CF)のモデリング

免疫蛍光分析

 

免疫蛍光分析により、CF胆管疾患モデル(CF-CLC)CFTRの発現レベルは、野生型胆管(WT-CLCs)よりも低く発現されることがわかりました。

1. 免疫蛍光分析より検出されたCFTRのタンパク質発現 (CF-CLCs: CF疾患モデル胆管オルガノイド、wt-CLCs: 健常胆管オルガノイド、スケールバー=100µm)

 

CFTR機能 – VX809

最低強度値に補正されたMQAE蛍光強度。 MQAE蛍光は塩化物の存在下で急冷されるが、硝酸塩の影響を受けません。 細胞外の塩化物変化に応答する、細胞内および管腔内の塩化物の変化は、CFTR機能依存します。 MQAE蛍光は、細胞外塩化物を枯渇させる働きを有する硝酸塩濃度に応答して増加し、健常型およびVX809において処理されたCF胆管疾患モデルにおける塩化物濃度が低下します。しかしながら、CF疾患胆管モデルおよび、VX809CRTR阻害剤172の組み合わせにより処理されたCF疾患胆管モデルにおいては、対応が見られません(エラーバーは標準偏差)。

 

胆管オルガノイドは、種々の塩化物濃度を有する培地に応答して適切に改変された細胞内クロライドを有しますが、CF胆管疾患モデルにおいて変化は観察されず、これらの細胞に機能性CFTRが存在しないことを裏付けています。

2. 各種CF胆管における48時間の培養結果。CF胆管疾患モデルをVX809と反応させたオルガノイドは、健常型胆管オルガノイドと類似したMQAEの指標となった。この傾向はCFTR阻害剤172を投与することにより失われるため、VX809によりCF胆管疾患モデルの表現型が変化され、CFTR機能が改善されることが確認できる。